Зав.лабораторией — канд.биолог. наук Ирина Борисовна ЗБОРОВСКАЯ
Тел.: (495) 324-17-64; (499) 612-96-05

 

 

 

 

 

 

Лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов была создана в 1991г. профессором, доктором биологических наук А.Г. Татосяном.

 
Тема научных исследований лаборатории является интегральной составной частью НИР НИИ канцерогенеза и посвящена идентификации молекулярно-генетических факторов развития опухолевого процесса для молекулярной диагностики и терапии рака. Коллектив лаборатории направляет свою деятельность на исследование генов и белков системы передачи сигналов, ответственных за трансформацию и прогрессию опухолевых клеток, а также выявление молекулярных маркеров, ассоциированных с прогрессией опухолей человека.
Исследования лаборатории проводились и будут проводиться по двум основным направлениям:
— идентификация генов, участвующих в процессе метастазирования трансформированных клеток;
— поиск молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с определенными типами неоплазий человека;
Работы по первому направлению традиционно проводятся на
экспериментальной модели RSV- трансформированных клеток сирийского хомяка (Дейчман и др.), и их производных, отличающихся по уровню метастатической активностью in vivo. Ранее показано, что онкогенный потенциал v-src-белка в клетках с различной метастатической активностью различен и реализуется по разным схемам системы передачи сигнала. Предполагается продолжить изучение внутриклеточных механизмов метастазирования с целью доработки концепций профессора А.Г. Татосяна и сотрудников.

План исследований
1. Продолжить изучение влияния H-ras-зависимого внутриклеточного сигнального пути на метастазирование спонтанно и вирус-трансформированных клеток. Идентифицировать последующие звенья в ранее выявленном Ha-ras/RalGDS/RalA каскаде, задействованном в реализации метастатического потенциала клеток. Предполагается:
• получить генно-инженерные конструкции, экспрессирующие
последовательности Ral-зависимых белков, в активированном, доминантно
-негативном и мутантном по способности ко взаимодействию с
отдельными белками-мишенями вариантах, а также siRNA к некоторым
белкам семейства Ral.
• получить панель производных линий с введенными в различных сочетаниях
генами исследуемого каскада (RalGDS,RalA,RalB,CDC42,Rac,Rho т.д.)
• определить метастатическую активность (в СМА и ЭМА тестах) клеток
полученных линий и сравнить с исходными.
• провести сравнительный анализ активности выявленных в данном ис-
следовании дифференциально экспрессирующих белков, ассоциированных
с изучаемым сигнальным каскадом.
2. Исследовать модуляцию активности гена DAP-киназы, продукция которого коррелирует с утратой трансформированными клетками как экспериментальной, так и спонтанной метастатических активностей. Планируется:
• получение лентевирусных векторных конструкций с регулируемой
экспрессией проапоптотического гена DAP-киназы, ассоциированного со
снижением метастатического потенциала клеток экспериментальных
линий, продемонстрированного в предыдущих работах лаборатории.
• инфекция полученными конструкциями различных спонтанно и v-src-
трансформированных фибробластов модельных линий с целью детального
изучения механизма действия DAP-киназы.
3. Оценить роль shMDG1, являющегося одним из белков-шаперонов класса
Hsp40, в метастазировании на клеточных моделях и в клинических образцах. Предварительно показано, что молекулярный шаперон shMDG1 коррелирует с подавлением метастатического фенотипа трансформированных клеток и, возможно, участвует в процессе деградации белков ЭПР и регуляции апоптоза.
4. Провести фенотипирование in vitro всех имеющихся в распоряжении лаборатории клеточных культур (более 60) (тестирование на инвазивность, рост в полужидком агаре, индекс пролиферации и т.п.).

При работе по второму направлению внимание будет сосредоточено на некоторых аспектах генетического полиморфизма, а также ряде соматических молекулярных нарушений, которые потенциально могли бы использоваться в клинической практике в качестве молекулярных маркеров для формирования групп канцерогенного риска, для ранней диагностики и прогнозирования течения ряда онкозаболеваний.
План работы включает:

• сравнительный анализ структурных и эпигенетических повреждений и
  экспрессии ключевых генов, обеспечивающих работу процесса деления,
  а также некоторых белков, вовлеченных в систему передачи сигналов,
  клеточную адгезию и апоптоз в серии последовательно взятых биопсий
  пролиферирующего плоского эпителия индивидуумов без видимой
  онкопатологии, но имеющих высокий риск развития рака.
  • дальнейший анализ молекулярных нарушений генов, контролирующих пролиферацию (в частности p16INK,p15INK,Rb,p53,ARF,DAPK,bcl 2 и т.д.) на разных стадиях развития злокачественных опухолей. Предполагается оценить степень выраженности молекулярных нарушений при предраковых изменениях слизистой оболочки верхних дыхательных путей (дискератозы: гиперплазия, лейкоплакии, кератоз, пахидермии), в доброкачественных и злокачественных опухолях гортани и легкого, а также провести подобный молекулярный скрининг при опухолевой патологии мочевого пузыря и поджелудочной железы.
  • продолжение исследований генетических детерминант и структурных нарушений в различных локусах короткого плеча 1 хромосомы, ассоциированных с развитием и прогрессией немелкоклеточного рака легкого. Идентификация генов в наименьших районах перекрывания делеций в локусе 1р32-36, связанных с опухолевой прогрессией и потеря гетерозиготности 6 маркеров из этих локусов, достоверно коррелирующая с низкой постоперационной выживаемостью больных НМРЛ, дает основание для широкого внедрения разрабатываемых тестов в практику индивидульного прогнозирования течения процесса в клинике.
  • углубление исследований полиморфизма гена HRAS и глутатион -S-трансферазы (изоформа GSTT и GSTM) и, ассоциированных с развитием и прогнозом рака легкого, молочной железы и т.д.

Предполагается объединение двух направлений работы лаборатории, для чего планируется проведение первичного скрининга клинических образцов опухолей человека на различных стадиях прогрессии (в первую очередь — метастатические поражения) в отношении активности генов, отобранных ранее методами сравнительной гибридизации на чипах (Array-hibridization) и дифференциального дисплея в экспериментальных клеточных культурах. К обнаруженным в данных экспериментах генам с дифференциальным уровнем экспрессии в клетках с различным метастатическим потенциалом относятся ran, кодирующий цитоплазматический транспортный белок, tbca, кодирующий шаперон тубулин-бета, mdg1- ген диффернциации микроваскулярного эпителия (семейство HSP40) и bet1, относящийся к группе v-SNARE, отвечающих за узнавание мембраны целевого компартмента везикулярным пузырьком. Уже получена к ДНК гена bet1 человека - несущая транслируемую область белка ВЕТ1, PCR- продукт bet 1 и mdg1 клонирован в экспрессирующиеся векторы. Данное исследование будет направлено на поиск потенциальных маркеров метастазирования у человека.
Взаимодействие с подразделениями ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.
Некоторые из перечисленных выше работ проводились и в дальнейшем будут проводиться совместно с различными подразделениями РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.
Взаимодействие с другими институтами в России и за рубежом.
Лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов сотрудничает с МГУ им. М.В. Ломоносова, НИИ пульмонологии МЗ России, Медицинской Академией им. Сеченова, НИИ хирургии им. А.В. Вишневского РАМН, Медико-диагностическим центром НИИ медгенетики МЗ, РГНЦ РАМН, участвует в программах международного сотрудничества с коллегами из Франции и США.